蠟樣芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒操作流程：
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
腦鈉通道蛋白2抗體
腦鈉通道蛋白4抗體
小腸鈉通道蛋白5抗體
APXL蛋白抗體
酸敏感離子通道蛋白3抗體
天門冬氨酸β羥化酶抗體
精氨酸加壓素受體2抗體
細(xì)胞骨架肌動蛋白樣蛋白3抗體
膜粘連蛋白8抗體
水通道蛋白8抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體
凋亡抑制因子5抗體
水通道蛋白-3抗體
載脂蛋白D抗體
丁酰基輔酶A合成酶3抗體
脂肪細(xì)胞源性亮氨酸氨基肽酶抗體（血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)蛋白）
線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體
ABL2蛋白抗體
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE1抗體
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體
Acinus抗體
醋酸激酶1抗體
促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)抗體
促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(18-39)抗體
促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體
活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體
α1酸性糖蛋白1/類粘蛋白1抗體
α1酸性糖蛋白2抗體（類粘蛋白2）
磷酸化水通道蛋白2抗體
細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
