ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一種常見(jiàn)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可用于檢測(cè)血清、唾液、尿液等生物樣本中的蛋白質(zhì)、抗體等分子。該技術(shù)基于特異性抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)，利用酶標(biāo)記的二抗或底物進(jìn)行檢測(cè)。ELISA有直接ELISA、間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA等不同類(lèi)型，具有高靈敏度、特異性和可重復(fù)性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。

那ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果不如預(yù)期是什么原因呢

（1）低信號(hào)/陰性結(jié)果：

    ? 樣品處理問(wèn)題：可能存在樣品稀釋不當(dāng)、保存不當(dāng)、存在干擾物質(zhì)等。

    ? 抗體質(zhì)量問(wèn)題：使用的抗體可能與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合不充分或不特異。

    ? 實(shí)驗(yàn)操作問(wèn)題：可能存在洗滌不徹底、孵育時(shí)間過(guò)短等實(shí)驗(yàn)操作不準(zhǔn)確的問(wèn)題。

 

（2）高背景/假陽(yáng)性結(jié)果：

    ? 阻斷問(wèn)題：阻斷步驟不充分，導(dǎo)致非特異性結(jié)合。

    ? 抗體交叉反應(yīng)：使用的抗體可能與其他非目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。

    ? 樣品污染：存在非特異性的樣品污染，如細(xì)胞碎片、大量蛋白質(zhì)等。

 
（3）結(jié)果變異性：

    ? 實(shí)驗(yàn)條件問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)條件（如溫度、濕度、孵育時(shí)間）的不一致性可能導(dǎo)致結(jié)果的變異性。

    ? 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性問(wèn)題：可能存在實(shí)驗(yàn)操作的差異或者試劑批次的差異，影響結(jié)果的一致性。

 
（4）非線性結(jié)果：

    ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備可能存在誤差，導(dǎo)致濃度計(jì)算不準(zhǔn)確。

    ? 高濃度樣品稀釋問(wèn)題：如果使用高濃度的樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尡壤x擇不當(dāng)可能導(dǎo)致非線性結(jié)果。