CD134分子ELISA檢測試劑盒標(biāo)本的采集與保存：
1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即
可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，
取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實驗室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。
4、其它生物標(biāo)本：請1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟：
夾心法，一般的操作步驟為:
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體;
加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié);
洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果;
間接法，一般的操作步驟為：
將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。
加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結(jié)。
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器測定塑膠盤中的吸光值，以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法，其操作步驟為：
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。