NCI-H661(大細(xì)胞肺癌細(xì)胞)細(xì)胞處理：

1)復(fù)蘇細(xì)抱:將會(huì)有1mL細(xì)胞液的凍存管迅速放入37て水浴中(水回要低于存管蓋部)見解點(diǎn),移入事先準(zhǔn)好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml高心管中混合均勻。在1000RPM條件下高心4分鐘,棄云上清液,加入1mlL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)抱懸液移入?有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并查細(xì)密度。

2）細(xì)胞,傳代可參考以下方法

方法一:收集細(xì)抱,1000RPM,常條件下離心5分鐘,?去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)長(zhǎng)液按1:2到1:5的比例分到新的?8m培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法ニ:可遠(yuǎn)擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)抱懸起,將細(xì)抱懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8m培養(yǎng)基的新皿或善瓶。

3)細(xì)凍存:待細(xì)生長(zhǎng)狀態(tài)良好

存上清液(防止細(xì)抱吸走),加入部分新年培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在東存管中加入10%DMSO勻后進(jìn)行凍存。凍存細(xì)抱時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1)細(xì)抱凍存培養(yǎng)基是一種用于乳動(dòng)物細(xì)的卻用型完全凍存培養(yǎng)基,其所含治牛血清和牛血清例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細(xì)抱活力以及解凍后的細(xì)抱復(fù)蘇效果。

2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)凍存培養(yǎng)基,?10%DMSO,適用于多種干細(xì)抱和原代抱(無(wú)色素細(xì)胞除外)的。