SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)抱凍存方案:

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)抱胞六存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具依細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

1.配制」存培養(yǎng)基,于2C至8°C下儲(chǔ)存,夏至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于用細(xì)系。

2凍存貼壁細(xì)抱胞,利用傳代時(shí)所月方法輕柔地使細(xì)胞從廷織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)抱所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)染法或普使用 Countess(⑤自動(dòng)細(xì)計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)態(tài)數(shù)和活細(xì)百分比。根據(jù)所需活細(xì)

4.以大約100-200X9的離心力將細(xì)胞暴液楽心5至10分鐘。在無(wú)條件下小心鑰持掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)抱胞沉定。

注:心速度和時(shí)?取決于細(xì)種類

5.月預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新暴浮細(xì)胞沉,將其調(diào)至該細(xì)抱適會(huì)的活細(xì)胞密度。凍細(xì)胞,使涅度每分鐘大約降低1C?；蛘?將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存?zhèn)}中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。