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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2A（干細(xì)胞庫(kù)保藏）形態(tài)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2A（干細(xì)胞庫(kù)保藏）形態(tài)
種屬:E14TG2A

類型:小鼠胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

形態(tài):球形*

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:mES完全培養(yǎng)液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES級(jí)FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（終濃度為1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2A（干細(xì)胞庫(kù)保藏）形態(tài)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2A（干細(xì)胞庫(kù)保藏）形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
吲哚美辛（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Indometacin  人脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanLipopolysaccharides,LPSELISAKit 96T/48T  Humanai-glycoproteinaibody,GPELISA試劑盒人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

西米替汀質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,A型Cimetidine  大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)試劑盒 Rat Peosidine ELISA Kit  Humancadherln-relatedneuronalreceptor1,C-1ELISAKit人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(C-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

西米替?。?biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Cimetidine  英文名稱RatDHEAELISAKit大鼠脫氫表雄同(DHEA)規(guī)格：96T/48T  人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

阿德福韋/阿德福韋酯質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Adefovir dipivoxil  紅細(xì)胞膜性囊泡(RSOV和IOV)制備試劑盒20  兔子Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)試劑盒 Rabbit cross linked C-telopeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
英文名稱HumanNOELISAKit人(NO)ELISA規(guī)格：96T/48T  93-39-0茵芋苷品牌  Skimmin

化微粒體1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20  56725-99-6淫羊藿苷I規(guī)格  Icarisid I

RatImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒大鼠球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  113558-15-9淫羊藿苷II   Icarisid II

小鼠粘蛋白5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC5AC ELISA Kit  489-32-7淫羊藿苷說(shuō)明書  Icariin

白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T  5240-95-9淫羊藿素品牌  Icaritin
26544-34-3芹菜苷規(guī)格  Apioside   英文名稱RatThyroglobulinELISAKit大鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

26472-41-3律草酮品牌  humulone   英文名稱RatThromboxaneB2ELISAKit大鼠素(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2643-85-8水合氧化前胡素說(shuō)明書  Oxypeucedanin hydrate  英文名稱RatThromboxaneB2ELISAKit大鼠素(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

26342-66-5鬧羊花III規(guī)格  Rhodojaponin-III   英文名稱RatthrombieceptorELISAKit大鼠凝血酶受體()規(guī)格：96T/48T

26342-66-5鬧羊花III規(guī)格  Rhodojaponin-III  英文名稱RatthrombieceptorELISAKit大鼠凝血酶受體()規(guī)格：96T/48T
小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2A（干細(xì)胞庫(kù)保藏）形態(tài)小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC2 ELISA Kit  552-59-0櫻黃素說(shuō)明書  Prunetin

白三烯C4(LTC4)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T  491-80-5鷹嘴豆芽素A品牌  Biochanin A

犬球蛋白A(IgA)試劑盒 Canine Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit  509-18-2硬飛燕草堿規(guī)格  Belsoline

英文名稱HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorELISAkit人血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF-AB)規(guī)格：96T/48T  10236-47-2柚皮苷   naringin

化微粒體1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20  480-41-1柚皮素說(shuō)明書  Naringenin